毛白杨木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35
原核可溶性表达方法研究

来源：江苏农业科学杂志2019年第第08期北京时间：

作者：李钰华; 李爽; 盖颖

单位：北京林业大学生物科学与技术学院/林木育种国家工程实验室，北京 100083

摘要：从毛白杨中克隆得到木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35基因，根据SignalIP在线软件预测蛋白信号肽，并分别构建至pET28a、pET32a、pGEX-4t-1、pMAL-c5e、pET 43.1a等5种原核表达载体，经双酶切和测序验证后转化至BL21(DE3)感受态，使用终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导其表达目的蛋白。经SDS-PAGE检测，结果表明5种载体均可表达目的蛋白，pET28a、pET32a、pGEX-4t-1等3种载体所表达蛋白均以包涵体的形式存在，而pMAL-c5e和pET 43.1a载体携带蛋白表达量高并且所表达蛋白50%为可溶性蛋白，实现了毛白杨PtoXTH35在原核表达系统中的高效可溶性表达，该试验为后续进一步研究毛白杨PtoXTH35的体外功能奠定了基础。

关键词：毛白杨;木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶;原核表达;包涵体;可溶性蛋白

基金资助：国家自然科学基金(编号：31300498)。