猪伪狂犬病毒实时荧光定量PCR检测方法
的建立及初步应用
来源：江苏农业科学杂志2019年第第07期北京时间：
作者：温书香; 安利民; 赵协; 张军; 潘燕燕; 葛位西
单位：河南省漯河市动物疫病预防控制中心，河南漯河 462300
摘要：为建立一种快速、特异、鉴别诊断猪伪狂犬病毒野毒感染与疫苗免疫株，参考GenBank上公布的猪伪狂犬病毒gE基因序列设计了1对引物，以猪伪狂犬病毒核酸作为模板，PCR方法将扩增得到的核酸序列克隆到PEGM-18T载体上，将克隆载体转化到DH5α感受态细胞中，测序鉴定阳性重组质粒作为标准品建立猪伪狂犬病毒荧光定量PCR检测方法。结果表明，本研究所建立的猪伪狂犬病毒荧光定量PCR方法检测灵敏度可达10拷贝，与蓝耳病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒不发生交叉反应，具有良好的特异性和可重复性。此外，对33份疑似猪伪狂犬病料也作了检测，结果表明，2份病料均为阳性。本研究建立的猪伪狂犬病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、不发生交叉反应等优点，可用于日常猪伪狂犬病毒野毒感染与疫苗免疫株的鉴别诊断。
关键词：猪伪狂犬病毒;荧光定量PCR技术;灵敏度;标准曲线
基金资助：2015年河南省漯河市青年拔尖人才支持计划。
