中华鳖胚胎组织原代细胞培养技术的研究

来源：江苏农业科学杂志2019年第第06期北京时间：

作者：曹铮; 林锋; 卢淑娟; 吕孙建; 刘莉

单位：农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/浙江省淡水水产研究所，浙江湖州 313001

摘要：基于当前市场上中华鳖商业化细胞缺乏，不利于开展其病害防控研究的现状，以中华鳖胚胎为对象，采用组织块原代培养技术，从孵育15~20 d的受精卵中获得适宜的胚胎组织，经抗生素、乙醇消毒，通过无菌条件下将组织块均匀分散贴壁在细胞瓶中，然后于30 ℃恒温培养箱中贴壁培养4 h后加入无血清M199培养基多次清洗，从而获得了中华鳖胚胎组织原代细胞；在此基础上分别对中华鳖胚胎细胞传代培养条件、冻存与复苏等进行系统性研究，初步确定中华鳖胚胎细胞培养温度为26 ℃，M199或L-15培养基，血清浓度为15%(体积分数)，通常7 d传代1次；二甲亚砜冻存保藏后，细胞复苏生长状况正常。

关键词：中华鳖;胚胎;原代细胞;培养

基金资助：浙江省科研院所扶持专项(编号：2017F50014)；浙江省自然科学基金(编号：LY15C190001)。