印度梨形孢的荧光定量PCR检测及其在水稻根系的定殖测定

来源：江苏农业科学杂志2023年第第2期北京时间：

作者：夏杨;徐彬;李传明;刘琴;韩光杰;黄立鑫;祁建杭;陆玉荣;徐健

单位：1.江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站，江苏扬州 225007； 2.扬州绿源生物化工有限公司，江苏扬州 225008

摘要：印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种促进作物生长、增强植株抗逆性的多功能根系内生真菌。传统染色镜检和PCR方法检测存在干扰误差大、灵敏度不高、难以定量等问题。基于P. indica转录延伸因子EF1α基因建立P. indica的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，并通过对水稻苗根系P. indica的定殖检测，比较与染色法、常规PCR法检测结果的差异。结果表明，利用EF1α基因序列引物扩增获得84 bp特异性产物，以特异性产物构建重组质粒pCE2-Pi作为qPCR扩增的标准品模板，建立的标准曲线线性关系良好且灵敏度高，qPCR检测下限为203×102 copies/μL，较常规PCR敏感度提高1 000倍，实现P. indica的快速、准确、定量检测。对水稻苗根系P. indica的定殖检测进一步表明，染色法检测受取样部位影响大，仅在定殖7 d的部分根系中检出，而PCR法灵敏度较低，也只在定殖7 d的根系中扩增出产物。采用qPCR方法在3~13 d的定殖周期根系中都检测到了P. indica的有效定殖，定殖7 d扩增产物最高，为1.51×104 copies/μL。

关键词：印度梨形孢;实时荧光定量PCR;水稻;定殖检测