怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like基因克隆及其功能分析

来源：江苏农业科学杂志2023年第第2期北京时间：

作者：夏瑾华;李丹丹;李然;刘贤泥;刘子捷;罗冰;欧丽佳

单位：1.上饶师范学院生命科学学院，江西上饶 334001； 2.上饶农业技术创新研究院，江西上饶 334001；3.上饶市药食同源植物资源保护与利用重点实验室，江西上饶 334001； 4.上饶市三叶青保育与利用技术创新中心，江西上饶 334001

摘要：通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选得到怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like基因的核心片段，利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术克隆怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like基因，并对其进行序列分析、亚细胞定位和器官表达分析。结果表明，怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like基因cDNA总长度为828 bp，G+C 含量为46.50%；怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like由275个氨基酸组成，分子量为 30 728.97 u，等电点为5.39，为疏水性蛋白；二级结构由α-螺旋(28.36%)、β-片层(20.73%)、无规则卷曲(5091%) 构成；三级结构为单体跨膜蛋白；预测怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like主要存在液泡膜中；怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like与葡萄烟草病毒增殖蛋白2A(GenBank：XP_034708140.1、XP_002279170.2)的同源性最高，同源性达到86.79%。通过烟草叶片亚细胞定位分析表明，烟草病毒增殖蛋白2A-like定位于细胞质和细胞核中。实时定量PCR结果显示，烟草病毒增殖蛋白2A-like基因在怀玉山三叶青2个栽培种中的表达存在器官特异性，怀玉2号和怀玉1号均在叶中表达量最高。怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2A-like具有典型烟草病毒增殖蛋白2A的结构特征，氨基酸序列及核酸序列与同源物种相似度较高，进化上较为保守，且可降低植株的光合作用效率。

关键词：怀玉山三叶青;烟草病毒增殖蛋白2A-like;基因克隆;表达分析;亚细胞定位