抗新型鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

来源：江苏农业科学杂志2024年第第21期北京时间：

作者：代格;章丽娇;黄欣梅;杨靖;刘青涛;韩凯凯;刘宇卓;李银;薛峰;赵冬敏

单位：1.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095； 2.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014； 3.江苏大学生命科学学院，江苏镇江 212013

摘要：制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体，为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒，转化BL21、IPTG诱导，原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白，并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明，重组蛋白主要以包涵体的形式表达且具有一定的免疫学活性。以原核表达的Cap蛋白为免疫原，免疫6~8周龄BALB/c雌性小鼠，对免疫后血清效价为阳性的小鼠取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合。做间接ELISA筛选出阳性克隆，并以有限稀释法连续进行3次亚克隆，成功筛选出1株分泌抗新型鹅星状病毒Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株，命名为1D7，采用腹水法大量制备单克隆抗体，效价可达1 ∶64 000。鉴定出1D7的亚型为IgM。1D7分别与重组Cap蛋白和接种新型鹅星状病毒的LMH细胞进行Western Blot分析，发现该单抗既能识别重组Cap蛋白又能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。

关键词：鹅星状病毒;Cap蛋白;原核表达;单克隆抗体