葡萄致腐菌灰葡萄孢及其拮抗菌贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定

来源：江苏农业科学杂志2024年第第15期北京时间：

作者：刘萍;牛新湘;管力慧;等

单位：1.新疆农业科学院微生物应用研究所，新疆乌鲁木齐 830091； 2.新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所，新疆乌鲁木齐 830091；3.新疆大学生命科学与技术学院，新疆乌鲁木齐 830052； 4. 新疆特殊环境微生物实验室，新疆乌鲁木齐 830091；5. 农业农村部西北绿洲农业环境重点实验室，新疆乌鲁木齐 830091

摘要：分离筛选出对葡萄致腐菌灰葡萄孢有较强拮抗作用的拮抗菌，丰富葡萄采后保鲜拮抗菌资源，以期为葡萄灰霉病的生物防治提供理论依据和奠定应用基础。利用组织块分离法在腐烂的葡萄果实中分离得到灰葡萄孢，梯度稀释法从葡萄园土壤中分离得到潜力拮抗菌，通过平板对峙及琼脂扩散法筛选出拮抗作用较强的生防菌，并通过形态学观察、生理生化测定、生物学鉴定确定其种属。通过对拮抗菌进行溶血性测定初步探索其是否对人体有溶血作用。分离得到的葡萄致腐菌通过形态学观察，病原菌PH-23菌丝初期呈灰白色，继续培养会逐渐转变为淡淡的青灰褐色，菌丝繁盛，孢子众多。对病原菌PH-23 进行ITS、β-tub序列分析，结合形态学特征确定其为灰葡萄孢。致病力测定结果表明，PH-23接种后葡萄症状与葡萄灰霉病症状相符，腐烂严重。筛选得到对葡萄致腐菌PH-23拮抗作用较强的生防菌TP-1，抑菌圈直径为22.49 mm。通过形态学观察，菌体为杆状，芽孢呈椭圆形，大小为0.62 μm×2.35 μm。TP-1革兰氏染色阳性。生理生化鉴定结果初步认为TP-1为芽孢杆菌。基于16S rDNA基因、rpoB基因、gyrB基因序列分析确定其为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。拮抗菌TP-1的溶血性测定显示其对人体无溶血作用。拮抗菌TP-1对灰葡萄孢有较强的拮抗作用，在葡萄采后贮藏及生物保鲜中具有潜在的应用价值。

关键词：葡萄灰霉病;灰葡萄孢;生物防治;生理生化鉴定;拮抗菌