丹参SmWRKY33基因的克隆与表达分析

来源：江苏农业科学杂志2024年第第3期北京时间：

作者：龚婷;刘灵娣;温春秀;武玉翠;王升;万修福;孙亚倩;姜涛

单位：1. 河北省农林科学院经济作物研究所，河北石家庄 050051； 2. 河北工程大学园林与生态工程学院，河北邯郸 056038；3. 道地药材国家重点实验室，北京 100700

摘要：为了研究WRKY33基因在丹参非生物胁迫中的作用机制，以白花丹参为试验材料，对丹参转录组数据进行分析，挖掘出丹参WRKY33基因参考序列并设计特异性引物，利用基因克隆技术从丹参中克隆出WRKY33基因的全长cDNA，命名为SmWRKY33。对SmWRKY33基因进行生物信息学分析，同时利用荧光定量方法探究SmWRKY33基因在逆境胁迫下的表达模式。结果表明，SmWRKY33基因核苷酸长度为1 635 bp，编码544个氨基酸。生物信息学分析显示，SmWRKY33基因的理论相对分子量为60 835.66，等电点为7.00，定位于细胞核，不存在跨膜区及信号肽，SmWRKY33蛋白为不稳定亲水蛋白。亲缘关系显示，SmWRKY33与紫苏、芝麻、白花泡桐的WRKY33亲缘关系较近。密码子偏好性分析得出拟南芥真核表达最适应丹参SmWRKY33基因的外源表达。qRT-PCR结果表明，SmWRKY33基因在低温、高温、PEG、NaCl等逆境胁迫诱导下具有不同的表达模式，其中低温、NaCl能显著诱导SmWRKY33基因的高表达，说明该基因对温度调节、盐胁迫较为敏感，猜测其参与温度、盐胁迫调控反应机制。本试验首次从丹参中克隆出SmWRKY33基因，探讨了该基因在丹参逆境胁迫下的作用机制，旨在为培育丹参的抗逆新品种提供参考基因。

关键词：丹参;SmWRKY33基因'SmWRKY33基因;生物信息学;qRT-PCR;基因克隆