单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的
分子特征及其表达

来源：江苏农业科学杂志2019年第第18期北京时间：

作者：王立霞; 孟庆玲; 乔军; 郭晶; 伍晔晖; 才学鹏; 蔡扩军; 王登峰

单位：1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003； 2.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州 730046；3.乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆乌鲁木齐 830063； 4.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000

摘要：应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序，并对其进行生物信息学分析；通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列，并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体，转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside，简称IPTG)诱导表达，应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性。序列分析结果表明，扩增得到的lmo0549基因全长为 2 034 bp，编码677个氨基酸，其信号肽序列是前23个氨基酸，在Lmo0549蛋白氨基酸序列中，从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LRR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域；同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个。同源性分析显示，LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e，(NC_003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%，且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性。SDS-PAGE分析显示，表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量；蛋白质印迹法分析表明，重组蛋白 Lmo0549 与LM阳性血清可发生特异性免疫反应，为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础。

关键词：单核细胞增生李斯特菌;内化素Lmo0549;克隆;分子特征;原核表达

基金资助：国家自然科学基金(编号：31360596、30960274)；国家重点研发计划(编号：2016YFD0500900)；乌鲁木齐市科技局渝乌科技合作项目(编号：Y161220001)；新疆生产建设兵团中青年科技创新领军人才计划(编号：2016BC001)。