含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素基因的
重组大肠杆菌的高密度发酵和免疫效果

来源：江苏农业科学杂志2019年第第17期北京时间：

作者：彭小兵; 杜吉革; 彭国瑞; 李旭妮; 董令赢; 冯丽芳; 蒋玉文

单位：1.中国兽医药品监察所，北京 100081； 2.北京中海生物科技有限公司，北京 100081

摘要：为确定含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的生产效率并评价其作为抗原的免疫效果，用生物反应器对重组大肠杆菌DE3-pET-AE进行高密度发酵，并将其制苗后以不同抗原剂量分别接种家兔和绵羊，间隔21 d进行二免，分别测定一免、二免动物混合血清的中和效价。发酵结果显示，培养物菌体密度D600 nm达20.3，相对表达量为27.6%，D600 nm与相对表达量的乘积为摇瓶培养的6.5倍，菌体湿质量为37.2 g/L；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示，目的蛋白以可溶形式表达。动物免疫效果评价结果显示，在家兔和绵羊上，抗原含量与免疫效果在一定的范围内均呈正相关，当接种量为300 μg/只时，免疫效果均最好；对腐败梭菌毒素与D型产气荚膜梭菌毒素的血清中和效价，在家兔上一免、二免分别达4与30、15与200，在绵羊上一免、二免分别达2与30、12与250。结果表明，DE3-pET-AE菌高密度发酵可获得高产量蛋白抗原，且抗原的免疫效果明显优于《中华人民共和国兽药典》合格标准。

关键词：α毒素'腐败梭菌α毒素;ε毒素'产气荚膜梭菌ε毒素;大肠杆菌高密度发酵;免疫效果;抗原含量;家兔;绵羊

基金资助：国家重点研发计划(编号：2017YFD0500905)；中国兽医药品监察所所级课题(编号：201701)。