猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化

来源：江苏农业科学杂志2019年第第15期北京时间：

作者：连凯琪; 周玲玲; 王英杰; 李翠; 宋玉伟; 张明亮

单位：河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院，河南安阳 455000

摘要：为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达，首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增 pIgG1-Fc 基因，并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达，然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间，实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明，成功克隆了pIgG1-Fc的基因666 bp，共编码222个氨基酸；重组原核表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确，重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达，表达的融合蛋白分子量约为36 ku。其最佳表达条件如下：在25 ℃条件下加入终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导6 h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达，为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础，为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。

关键词：Fc;原核表达;包涵体;融合蛋白

基金资助：安阳工学院博士科研启动基金(编号：BSJ2016008)。