鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72基因克隆、蛋白
原核表达和抗体制备

来源：江苏农业科学杂志2019年第第14期北京时间：

作者：李双; 向涛; 周海峰; 吴霆; 顾伟; 王文; 孟庆国

单位：1.南京师范大学生命科学学院/江苏省水生甲壳动物病害重点实验室，江苏南京 210023；2.江苏省宝应县水生动物疫病预防控制中心，江苏宝应 225800

摘要：异育银鲫作为我国重要的淡水经济鱼类，其鳃出血病为主要病害，并造成重大经济损失，该病病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus Ⅱ，CyHV-2)。目前，研究主要在该病的检测和病理方面，对于免疫学检测方面研究较少。本研究根据CyHV-2 ORF72基因序列设计了1对特异性引物，利用患病异育银鲫肾脏DNA作为模板，通过PCR扩增得到CyHV-2 ORF72基因全长，该基因序列全长为1 113 bp，可编码370个氨基酸的蛋白。该基因与pET-28a表达载体连接构建重组原核表达载体pET-ORF72转入大肠杆菌中，经IPTG诱导表达得到了分子量约为45 ku的重组蛋白，与预测的蛋白大小基本一致。将纯化的重组蛋白皮下多点注射免疫新西兰大耳兔制备了ORF72的多克隆抗体，经Western Blotting检测抗体能与病毒粗提液有良好反应，特异性较好，本结果可为下一步建立疫苗和免疫检测方法奠定基础。

关键词：异育银鲫;鲤疱疹病毒Ⅱ型;ORF72;多克隆抗体;Western Blotting

基金资助：渔业重大技术集成与示范推广项目(编号：D2015-13-5)。