桑树SSR-PCR反应体系的优化
来源：江苏农业科学杂志2019年第第14期北京时间：
作者：刘玲; 陈祥平; 范小敏; 傅晓; 柯皓天; 吕银
单位：1.四川省丝绸科学研究院，四川成都 610031； 2.四川省丝绸工程技术研究中心，四川成都 610031
摘要：为了建立经济稳定的桑树简单重复序列(SSR)-PCR反应体系，为SSR分子标记在桑树研究中更广泛地应用提供试验基础，采用L16(45)正交试验设计和单因素试验，对桑树SSR-PCR反应体系中的模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和rTaq酶用量5个因素的4个水平进行优化分析，并比较这5个因素的不同浓度对扩增效果的影响。结果表明，各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为Mg2+、dNTPs>引物>模板DNA>rTaq酶。研究最终确立了最佳反应体系，即在10 μL反应体系中，含有1.5 μL 10~20 ng/μL DNA模板、0.4 μL 25 mmol/L Mg2+、0.5 μL 2 mmol/L dNTPs、各0.15 μL 20 μmol/L正反向引物、0.1 μL 5 U/μL rTaq酶和1 μL 10×loading buffer。通过稳定性检测，表明该体系能够用于桑树的SSR分析。
关键词：桑树;正交试验设计;单因素试验;SSR-PCR反应体系优化
基金资助：四川省科技计划(编号：2017JY0277)；四川省科技创新产业链项目(编号：2016NZ0004)。
