基于鸡卵清蛋白启动子的纳豆激酶慢病毒
表达载体表达特性的研究

来源：江苏农业科学杂志2019年第第13期北京时间：

作者：蔡薇; 吴志鹏; 赵俊生; 徐宁迎; 郭晓令

单位：浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310058

摘要：纳豆激酶(nattokinase，NK)是一种有效的抗血栓药物。基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体，旨在比较其在鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性。提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter，OV2)和雌激素反应元件(estrogen response element，ERE)的pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP重组质粒。通过PCR和双酶切进行初步鉴定，经生物公司测序、包装和滴定得转染传代培养的鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞，并采用荧光显微镜和qPCR法检测细胞表达产物。结果表明，载体pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP构建成功；且荧光显微镜下，鸡输卵管上皮细胞的绿色荧光多于成纤维细胞；qPCR检测发现NK正常表达。提示成功构建纳豆激酶慢病毒表达载体且在鸡输卵管上皮细胞中正常表达。

关键词：纳豆激酶;卵清蛋白启动子;雌激素反应元件(ERE);慢病毒载体;鸡输卵管上皮细胞;鸡胚成纤维细胞

基金资助：浙江省自然科学基金(编号：LY13C170001)。