北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达
和多克隆抗体制备

来源：江苏农业科学杂志2019年第第10期北京时间：

作者：徐娇; 朱楚然; 都明理; 王丽红; 隋春; 魏建和

单位：1.中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室/濒危药材繁育国家工程实验室，北京 100193； 2.佳木斯大学，黑龙江佳木斯 154007

摘要：利用带有促溶标签SUMO和纯化标签6×His的原核表达载体，构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后，用异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)诱导培养，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明，28 ℃和37 ℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白为抗原，免疫成年兔4次以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明，所得抗体效价较高。提取北柴胡毛状根及BcAP2-13超表达毛状根的总蛋白，免疫印迹检测结果表明，在2种毛状根蛋白样品中均能检测到与预计13-SUMO-His6蛋白分子量大小一致的条带，BcAP2-13过表达毛状根总蛋白样品的条带强于普通毛状根总蛋白样品的条带，与预期一致。成功制备了北柴胡BcAP2-13的多克隆抗体，为进一步研究北柴胡转录因子BcAP2-13的确切作用位点和调控机制奠定了基础。

关键词：北柴胡;转录因子;原核表达;多克隆抗体制备;免疫印迹

基金资助：中国医学科学院医学与健康科技创新工程-重大协同创新项目(编号：2016-I2M-2-003)。