微囊藻毒素LR免疫原及包被抗原的合成与鉴定

来源：江苏农业科学杂志2019年第第09期北京时间：

作者：何丹; 刘媛; 李先保; 龚航; 王丽; 郝佳; 张晓帅; 徐重新; 张存政; 刘贤金

单位：1.安徽科技学院，安徽滁州 233100； 2.江苏省食品质量安全重点实验室，江苏南京 210014

摘要：微囊藻毒素LR(MC-LR)分子量小于1 000 u，为半抗原，需要与载体蛋白偶联后才能刺激免疫应答用于抗体制备。本研究利用碳二亚胺法将MC-LR分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)进行偶联，获得免疫抗原(MC-KLH)和包被抗原(MC-BSA)。采用紫外扫描光谱、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)等3种方法对2种人工抗原进行鉴定，并对小鼠进行免疫。用间接非竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)和竞争ELISA测定了抗血清效价和敏感度。结果表明，紫外扫描光谱法可观察到2种人工抗原的紫外吸收谱与载体蛋白相比发生改变。通过SDS-PAGE法可以观察到MC-BSA分子量比BSA增大。另外质谱法测定的MC-BSA的相对分子量为76 515.84，计算得到的MC-LR与BSA的偶联比为10 ∶ 1。MC-KLH免疫小鼠后，抗血清效价最高达到1 ∶ 32 000倍，MC-LR对鼠多抗血清的抑制中浓度(I50)为0.53 μg/mL。成功合成了MC-LR的免疫原和包被原为其单克隆抗体的制备奠定了基础。还比较了3种鉴定方法的适用性和优缺点，为其他人工抗原的鉴定方法提供了有益的参考。

关键词：微囊藻毒素LR;抗体;免疫原;包被原;鉴定

基金资助：国家自然科学基金(编号：31701724)；安徽省家禽产业技术体系基金(编号：AHCYTX-10)；江苏省社会发展项目 (编号：BE2017706)；江苏省农业科技自主创新资金［编号：CX(15)1016］。