重组猪α干扰素工程菌的诱导表达及产物纯化

来源：江苏农业科学杂志2019年第第09期北京时间：

作者：沈继朵; 王聪; 张莉; 栗俞程

单位：1.河南中医药大学药学院，河南郑州 450046； 2.河南中医药大学科研实验中心，河南郑州 450046；3.河南省仲景方药现代研究重点实验室，河南郑州 450046

摘要：为获得大量猪α干扰素的重组蛋白，研究了其发酵条件，并对目的蛋白进行分离纯化。考察了不同IPTG诱导浓度(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mmol/L)、不同诱导温度(17、27、32、37 ℃)、不同诱导时间(0、2、3、4、5、6、7、8 h)对目的蛋白表达的影响；同时对包涵体进行提取、溶解变性进行研究，最后采用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白。采用SDS-PAGE电泳及Image Pro Plus 6.0软件分析电泳结果，结果显示，IPTG诱导浓度为 1.0 mmol/L、诱导温度为27 ℃、诱导时间为6 h时，目的蛋白表达量最多；超声波破碎细菌的最优时长循环为10 s/10 s；8 mol/L尿素溶解包涵体过夜可得到大量可溶性目的蛋白含量，Ni柱亲和层析后可去除大量杂蛋白，获得较纯的目的蛋白。可见本试验通过优化重组猪α干扰素诱导表达条件及纯化方法，获得了高表达、高纯度的重组猪α干扰素蛋白，为今后研究其生物活性奠定了初步基础。

关键词：猪α干扰素;工程菌;诱导表达;包涵体;纯化

基金资助：河南中医药大学科研苗圃工程项目(编号：MP2017-12)。