杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定

来源：江苏农业科学杂志2019年第第05期北京时间：

作者：崔潇婷; 顾玲玲; 吴萌; 张继玲; 王安平

单位：江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州 225300

摘要：为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定，将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5，同时感染摇瓶培养中的昆虫细胞Sf9，72 h后收集细胞沉淀，反复冻融3~5次后，离心取上清。经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀后，进行电镜观察和Western blot分析，并体外感染鸡成纤维细胞和鸡肝细胞系。SDS-PAGE结果显示，rAAAV得到了较好的纯化，电镜下可观察到大小约20 nm的典型细小病毒样粒子，Western blot分析数据显示rAAAV由3个结构蛋白组成，与野生病毒相似。体外表达试验结果显示，rAAAV能介导GFP报告基因在鸡细胞中稳定持久地表达。表明杆状病毒表达系统制备的rAAAV具有与野生病毒相似的性质，可应用于后继研究和开发应用。

关键词：重组禽腺联病毒;杆状病毒表达系统;鉴定

基金资助：国家自然科学基金(编号：31302096)；江苏省科技支撑计划(编号：BE2013415)；江苏省六大人才高峰项目(编号：NY-009)。