微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达

来源：江苏农业科学杂志2019年第第04期北京时间：

作者：仵陶; 安胜军; 邵铁梅; 朱正歌; 焦展; 刘培; 李雪

单位：1.河北化工医药职业技术学院/河北省高校生物反应器与蛋白类药物应用技术研发中心，河北石家庄 050026；2.河北中医学院科研中心，河北石家庄 050091； 3.河北师范大学生命科学学院，河北石家庄 050024

摘要：制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株，从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin，MI)，其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接，在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中，抗生素筛选得到转基因花生苗，之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示，试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术，并且得到了转基因花生苗；分子生物学技术鉴定结果显示，微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中，且在花生叶片中表达，其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法，为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础。

关键词：分子医药农业;转基因花生;微型人胰岛素;载体构建;基因表达

基金资助：河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号：ZD2014087)；河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号：ZH2012081)。