T7噬菌体穿孔素的克隆表达及对宿主损伤研究

来源：江苏农业科学杂志2020年第第24期北京时间：

作者：徐海; 鲍熹; 董洪燕; 郭长明; 邓碧华; 卢宇; 朱善元

单位：1.江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州 225300；2.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所，江苏南京 210014

摘要：为研究T7噬菌体穿孔素(Holin)蛋白对宿主细菌的增殖性能的影响，根据T7噬菌体gene 17.5设计引物，PCR扩增Holin基因和序列分析，将该基因插入原核表达载体构建重组表达菌BL-Holin。IPTG诱导Holin蛋白表达，SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白。分光光度法测定Holin蛋白对宿主细菌增殖性能的影响，扫描电镜观察重组菌诱导后表面结构的损伤情况。结果表明，成功扩增Holin基因，构建的重组菌能高效表达Holin蛋白。T7噬菌体Holin蛋白含有1个跨膜区，氨基端位于胞外、羧基端位于胞内。Holin蛋白的表达量随诱导时间延长而逐渐增加，细菌浓度从诱导0 h至2 h逐渐升高，2 h后细菌浓度开始下降，直至6 h，电镜观察发现诱导细菌表面塌陷、皱缩进而死亡。研究结果显示，Holin蛋白具有抑菌活性，这为进一步开发噬菌体抗菌制剂提供应用基础和技术支持。

关键词：穿孔素;表达;宿主损伤;T7噬菌体