素馨属植物ISSR-PCR反应体系的建立和优化

来源：江苏农业科学杂志2020年第第23期北京时间：

作者：荆玲侠;卜朝阳;崔学强;狄清琳;卢家仕

单位：1.广西壮族自治区农业科学院花卉研究所，广西南宁 530007； 2.广西大学农学院，广西南宁 530004

摘要：为了确定素馨属植物ISSR-PCR反应的最佳体系，以素馨属植物叶片为材料，采用单因素试验和正交试验设计2种方法对影响素馨属ISSR-PCR反应中的dNTPs 、Taq DNA聚合酶、引物、模板 DNA以及Mg2+ 5个因素进行4个水平的优化试验，通过试验建立了素馨属25 μL最佳反应体系：dNTPs浓度为0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物浓度为0.7 μmol/L、模板 DNA用量为2.5 ng、Mg2+浓度为1.0 mmol/L。在最佳反应体系下，从100条ISSR引物中筛选出了8条ISSR引物，并确定了各引物的最佳退火温度。利用29份素馨属材料进行最佳反应体系的验证，结果表明，该优化体系扩增条带清晰，稳定性高，重复性好，表明该反应体系适用于素馨属植物ISSR分子标记的研究。本研究可为素馨属植物遗传多样性以及亲缘关系等方面的研究提供参考依据。

关键词：素馨属;ISSR-PCR;单因素试验;正交设计