鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备

来源：江苏农业科学杂志2020年第第20期北京时间：

作者：毕振威;徐立波;夏兴霞;梁霆;王永山

单位：1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014；2.山东省招远市农业农村局，山东招远 265400； 3.江苏省农业农村厅，江苏南京 210036

摘要：为了制备鉴别犬瘟热病毒(CDV)流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体，将CDV 851弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化，免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合，经3~5次克隆，间接ELISA筛选，获得稳定分泌抗CDV的杂交瘤细胞2D12株。该细胞株分泌的单克隆抗体亚类为IgG1κ，与常见犬病毒不发生交叉反应。间接免疫荧光显示，单克隆抗体与CDV 851毒株发生特异性反应，与杆状病毒表达的CDV 851毒株H蛋白发生特异性反应。Western blot检测发现，单克隆抗体与2株CDV强毒株H蛋白不发生反应，而与2株CDV弱毒株H蛋白有特异性反应。双抗体夹心ELISA显示，单克隆抗体能检测CDV疫苗弱毒株而不能检测CDV强毒株。病毒中和试验证实，单克隆抗体对CDV 851弱毒株具有中和能力。制备了区分CDV强毒株和疫苗弱毒的单克隆抗体，为CDV的鉴别诊断技术研究奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒;单克隆抗体;流行毒株;疫苗毒株;鉴别检测