云红梨1号HY5基因原核表达载体的构建、表达和纯化

来源：江苏农业科学杂志2020年第第20期北京时间：

作者：苏俊;陈璐;马伟荣;杨谨;黄兴龙;陈霞;舒群

单位：1.云南农业科学研究院园艺作物研究所，云南昆明650205； 2.云南农业大学园林园艺学院，云南昆明650200；3.云南省红河州经济作物技术推广站，云南红河654400 ；4.云南省农业科学院经济作物研究所，云南昆明650205；5.石林县经济作物站，云南石林652200

摘要：HY5为调控光形态建成的转录因子，调控花青素的生物合成与累积。通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体，旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础。将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上，并对其进行诱导表达，通过谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果表明，重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确，表明重组质粒载体构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示，用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37 ℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株，在BL21菌株中均有明显的目的条带，诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku；PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达。通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体，诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：HY5基因'HY5基因;云红梨1号;原核表达载体;诱导表达;纯化