重组菌丝霉素在毕赤酵母中的分泌表达及活性研究

来源：江苏农业科学杂志2020年第第18期北京时间：

作者：邓赣奇; 陈柏东; 黄增颖; 宫莉; 张辉华; 刘燊

单位：佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东佛山 528000

摘要：为获得一种能分泌菌丝霉素的毕赤酵母菌并探讨菌丝霉素的活性，将优化的目的蛋白碱基序列与标签MBP基因序列融合，通过双酶切将重组基因序列插入到毕赤酵母pGAPZaA表达载体上并进行连接反应。取10 μL连接产物转化至感受态细胞，挑取含Zeocin(25 mg/L)平板筛选出的单菌落进行PCR鉴定，将阳性克隆送往测序公司测序。对鉴定正确的含有重组质粒的大肠杆菌DH5α进行活化培养并提取其质粒，得到的重组质粒进一步线性化和纯化，并电转入GS115感受态细胞中筛选出阳性克隆，诱导分泌蛋白，对其进行Western blot检测、纯化、活性分析和质谱鉴定，得到的重组蛋白为55 Ku左右，浓度为700 mg/L，纯度达到80%以上。质谱鉴定结果表明，蛋白序列的覆盖率达到98%，纯化后的蛋白也对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，成功构建出一株能够分泌菌丝霉素的毕赤酵母菌，这为菌丝霉素的工业化生产和研发新型绿色的饲料添加剂奠定了基础。

关键词：菌丝霉素;毕赤酵母;重组蛋白;饲料添加剂