产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建

来源：江苏农业科学杂志2020年第第17期北京时间：

作者：徐悦; 周明旭; 朱纯; 尹文竹; 马芳; 鲍熹; 张金秋; 卢宇

单位：1.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095； 3.江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地，江苏南京 210014；4.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州 225009； 5.江苏大学药学院，江苏镇江 212013

摘要：细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性，但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂。选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株，利用λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因，缺失大肠杆菌lpxM基因。结果显示，J5ΔlacI：：lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低；对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物，重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常。同时，腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大，发生炎性浸润，有明显的毒性反应。以上结果说明，J5重组菌的LPS已经区别于原菌，是低毒性的MPLA产物。上述重组株的成功构建，能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础。

关键词：大肠杆菌;MPLA;Red同源重组;佐剂;疫苗;细菌脂多糖