凤丹牡丹二氢黄酮醇-4-还原酶基因克隆及表达特性分析

来源：江苏农业科学杂志2020年第第10期北京时间：

作者：甘林鑫; 李厚华; 李 果; 刘鹏远; 韩美玲

单位：1.西北农林科技大学，陕西杨凌 712100； 2.莱布尼茨汉诺威大学，德国汉诺威

摘要：以凤丹种皮为材料，克隆花青素生物合成中的关键基因DFR，并进行功能验证。结果表明，凤丹DFR基因含有长度为1 092 bp的开放阅读框(ORF)，共编码364个氨基酸。其中，凤丹DFR蛋白的相对分子量为 40 796.17 u，理论等电点(PI)为5.76。实时荧光定量分析凤丹牡丹种子4个发育阶段的PoDFR基因表达水平，结果表明，在凤丹种子发育过程中，PoDFR基因的表达水平先增加后减少，在S2时期达到最高。构建PoDFR基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达以获得PoDFR的原核表达蛋白。体外酶促反应和高效液相色谱法表明，PoDFR蛋白可以催化二氢槲皮素合成无色花青素，通过与PoANS蛋白结合合成花青素，证明PoDFR基因具有相应的功能活性。

关键词：凤丹牡丹;DFR基因'DFR基因;二氢槲皮素;花青素;表达特性;功能