龙头鱼ISSR-PCR多态性引物最佳退火温度的筛选

来源：江苏农业科学杂志2020年第第8期北京时间：

作者：林彦均; 杨天燕; 朱岚倩; 郑亦佳; 王莹莹; 斯舒谨; 郭泽豪

单位：浙江海洋大学水产学院，浙江舟山 316022

摘要：为了开展龙头鱼遗传多样性和近缘物种间的遗传变异分析，建立龙头鱼的简单序列重复区间标记(inter-simple sequence repeat，简称ISSR)-PCR反应体系，拟筛选龙头鱼ISSR-PCR多态性引物的最佳退火温度。参考加拿大哥伦比亚大学(UBC)公布的100条ISSR引物，采用温度梯度PCR的方法，得到适用于龙头鱼基因组DNA扩增的12条ISSR分子标记引物，分别为811、834、836、840、841、842、844、853、873、880、881、899。12条引物中，最高退火温度为58.9 ℃，最低退火温度为47 ℃，两者间的差异达到了11.9 ℃。12条引物的变异系数为7.71%，相关系数为0.23。结果表明，龙头鱼ISSR多态性引物的最佳退火温度与理论退火温度间没有显著相关性，同一种引物的退火温度在不同物种中也存在一定的差异，需要通过温度梯度试验进行具体分析。

关键词：龙头鱼;ISSR-PCR;退火温度;引物筛选