基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞
IFN-β1编码序列的敲除

来源：江苏农业科学杂志2020年第第07期北京时间：

作者：曹兴林; 恽君雯; 陈丽; 宋伟; 侯继波; 冯磊; 徐业芬

单位：1.西藏农牧学院动物科学学院，西藏林芝 860000； 2.西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室，西藏林芝 860000；3.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014；4.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州 225009

摘要：为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系，使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除，构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先，根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体；然后，用3种载体共转染MDCK细胞，通过GFP阳性特征分选单细胞克隆，单细胞克隆培养在96孔板中。通过PCR扩增和对IFN-β1靶序列进行测序，确定了阳性MDCK单细胞克隆中IFN-β1的敲除。结果成功构建了具有IFN-β1敲除的MDCK单细胞克隆细胞系，与原始细胞相比，该细胞系的病毒增殖能力提高。

关键词：CRISPR/Cas9;犬肾(MDCK)细胞;IFN-β1'IFN-β1;禽流感病毒(AIV);增毒能力