苏云金芽孢杆菌cry1Da5基因的克隆与表达

来源：江苏农业科学杂志2020年第第2期北京时间：

作者：关鹏;秦培钢;代小娟;宋金东

单位：1.渭南职业技术学院农学院，陕西渭南 714026； 2.新疆医科大学基础医学部，新疆乌鲁木齐 830011

摘要：采用5对引物组合经2轮PCR扩增对苏云金芽孢杆菌QL75-2菌株中的cry基因进行鉴定，克隆得到1个cry1Da型基因片段。通过设计全长引物扩增得到该cry基因的全长序列，转入原核表达载体pET-28a中，在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，最后对表达蛋白进行生物活性分析。序列分析结果表明，该cry1Da基因全长3 495 bp，推测其编码1 164个氨基酸，组成分子量约132.01 ku的蛋白质。该预测蛋白质与已知的Cry1Da3蛋白质具有最高的序列同源性(99.7%)，该基因被国际杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Da5。生物活性分析结果表明，Cry1Da5蛋白质对鳞翅目的甜菜夜蛾幼虫具有较强的杀虫活性，其LC50为21.47 μg/mL，而对鳞翅目的棉铃虫幼虫无杀虫活性。因此，cry1Da5基因可作为一个新的cry基因资源在甜菜夜蛾的生物防治中应用。

关键词：苏云金芽孢杆菌;简并引物;cry1Da5基因'cry1Da5基因;棉铃虫;甜菜夜蛾;杀虫活性