鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定

来源：江苏农业科学杂志2021年第第15期北京时间：

作者：韩凯凯;严若峰;刘青涛;刘宇卓;李银;赵冬敏;黄欣梅;杨婧

单位：1.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095； 2.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014；3.江苏大学生命科学学院，江苏镇江 212013

摘要：甲基转移酶(methyltransferase，MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus，DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团，在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达，并对其生物学功能进行鉴定，以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板，设计针对MTase的特异性引物，提取TMUV RNA，反转录得到cDNA，以其为模板进行扩增，得到MTase的基因片段，然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中，构建重组质粒pCMV-Flag-MTase，提取去除内毒素的重组质粒，并转染至BHK-21细胞，通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达。结果显示，质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确，通过间接免疫荧光与Western Blot检测，重组质粒在BHK-21细胞内正常表达，表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性。

关键词：鸭坦布苏病毒;甲基转移酶;真核表达