香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化

来源：江苏农业科学杂志2021年第第5期北京时间：

作者：张丹;颜梦秋;张美彦;谭琦;宋春艳;尚晓冬

单位：上海市农业科学院食用菌研究所/农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/上海市农业遗传育种重点实验室，上海 201403

摘要：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微卫星分子标记的方法，广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中。该方法由于操作繁琐，目前在食用菌领域的应用尚不广泛。以香菇为研究对象，建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程，并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95 ℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化。结果表明，加样缓冲液与PCR反应液体积比为1∶2，95 ℃变性2~5 min，置于冰上冷却15~20 min，银染7 min，银染后胶板用去离子水洗5~10 s是正交试验的较优处理组合。试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程，该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点，对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值。

关键词：香菇;变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;微卫星标记;正交试验设计;银染试验