鹅星状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

来源：江苏农业科学杂志2022年第第22期北京时间：

作者：卢清侠;李伟;金前跃;郭振华;冯丽丽;邢云瑞;柴书军;邢广旭;张改平

单位：1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002； 2.河南农业大学生命科学学院，河南郑州 4500023；3.河南省农业科学院农业经济与信息研究所，河南郑州 450002

摘要：为了制备鹅星状病毒(goose astrovirus，GAstV)刺突(Spike)蛋白的单克隆抗体，并对获得的单克隆抗体的生物学特性进行鉴定，将大肠杆菌表达的截短Spike蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和单克隆抗体的筛选来获得阳性杂交瘤细胞，并进一步利用免疫印迹和间接免疫荧光技术进行单抗的鉴定；采用ELISA技术进行单克隆抗体亚型、抗体效价的测定；同时根据GAstV XX株 Spike蛋白序列合成重叠的多肽库进行单抗识别的抗原表位鉴定。共获得3株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1A5、2B4、12E6；免疫印迹和间接免疫荧光实验显示3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的免疫反应，其中2B4、12E6可与GAstV发生反应；亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为IgG2b亚类，单抗1A5为 IgG2a亚类；轻链均为κ链；敏感性结果显示，抗体效价都在1 ∶[KG-*3]51 200以上；抗原表位的鉴定结果表明单抗1A5识别的抗原表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI，单抗2B4识别的抗原表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM。本研究成功制备了针对GAstV Spike蛋白的单克隆抗体，并鉴定出2个新的抗原表位，为建立快速、简便的GAstV检测方法奠定了基础。

关键词：鹅星状病毒;刺突蛋白;单克隆抗体;抗原表位