西伯利亚鲟MHCⅡβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备

来源：江苏农业科学杂志2022年第第20期北京时间：

作者：田照辉;胡红霞;王巍;东天;孙爱

单位：北京农林科学院水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心，北京 100068

摘要：旨在构建西伯利亚鲟(Acipenser baerii)MHCⅡβ基因原核表达载体高效表达，并进行多克隆抗体的制备。根据GenBank西伯利亚鲟MHCⅡβ基因序列设计引物，并加上6-His标签和酶切位点，从西伯利亚鲟脾脏细胞中克隆可读编码框(不含信号肽)部分，克隆并测序鉴定后构建Pet30α-MHCⅡβ质粒，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，异丙基硫代半乳糖苷 IPTG诱导表达，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)鉴定，诱导表达的融合蛋白大小约为32 ku，能够与His抗体结合，融合蛋白主要以包涵体形式存在，在温度37 ℃时 1 mmol/L 的IPTG诱导4 h可以达到最佳表达量。将表达蛋白通过镍柱层析纯化后，制备兔多克隆抗体，抗体效价达到243 W，为深入研究西伯利亚鲟MHCⅡβ基因免疫学功能提供参考。

关键词：西伯利亚鲟;MHCⅡβ 基因'MHCⅡβ 基因;原核表达;多克隆抗体