1株产纤维素酶细菌的内切-β-葡聚糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

来源：江苏农业科学杂志2022年第第16期北京时间：

作者：郭建华;蒋海娇;郭宏文;邹东恢;王燕

单位：齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006

摘要：为对1种细菌来源的内切-β-葡聚糖苷酶进行分离纯化和酶学性质研究，利用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱等对细菌菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶进行了分离纯化，利用SDS-PAGE电泳对其纯度和分子量进行检测，考察温度和pH值对酶活力的影响，最后计算酶的反应动力学常数。结果显示，经分离纯化，获得2个酶活组分CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ，其纯化倍数分别为45.94倍和32.27倍，回收率分别为14.66%和833%。CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ分子量分别为38.99、45.53 ku，其最适作用温度分别为55~60 ℃和55 ℃，最适pH值均为7.5。温度低于70 ℃时，2种酶组分均对热稳定，并在pH值为6.0~8.0范围内具有良好稳定性。CMC酶Ⅰ的Km为2.55 g/L，Vm为37.59 μg/(min·mL)；CMC酶Ⅱ的Km值为4.37 g/L，Vm为28.82 μg/(min·mL)。结果表明，采用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱多种分离技术对菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶具有良好的分离纯化效果，经凝胶电泳检测，酶组分达电泳级纯度。酶学性质表明，菌株DM-4所产的2种CMC酶组分均为中性偏碱性纤维素酶，这与霉菌来源的纤维素酶有所不同。

关键词：纤维素酶产生菌;β-葡聚糖苷酶'内切-β-葡聚糖苷酶;分离纯化;酶学性质