泛素结合酶UBE2G2基因调控胞内布鲁氏菌存活的作用

来源：江苏农业科学杂志2022年第第16期北京时间：

作者：印双红;张俊波;张孟琴;易萌;易彩霞;蔡春连;毛宏;易继海;李志强;陈创夫

单位：1.铜仁学院大健康学院，贵州铜仁 554300； 2.铜仁学院农林工程与规划学院，贵州铜仁 554300；3.贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室，贵州铜仁 554300；4.铜仁学院材料与化学工程学院，贵州铜仁 554300； 5.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000；6.商丘师范学院生物与食品学院，河南商丘 476000

摘要：为了探讨泛素结合酶UBE2G2在胞内布鲁氏菌繁殖中的作用，通过分别构建过表达载体和设计合成小干扰RNA(siRNA)对UBE2G2基因进行过表达和沉默；利用MTT比色法检测UBE2G2基因沉默或过表达对细胞活性的影响；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测布鲁氏菌M5-90感染对UBE2G2基因表达的影响；用布鲁氏菌M5-90感染过表达和沉默UBE2G2基因的细胞，利用qRT-PCR检测细胞中CHOP基因表达的变化，利用菌落计数法检测胞内细菌数量的变化，利用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、白介素18(IL-18)和γ-干扰素(IFN-γ)水平的变化。结果显示，获得UBE2G2基因的过表达作用的载体pLVX-puro-UBE2G2；筛选出UBE2G2基因的干扰效果最佳片段为UBE2G2-83-siRNA；UBE2G2基因沉默或过表达对细胞活性没有影响；M5-90感染可提高细胞中UBE2G2基因的表达；M5-90感染过表达UBE2G2基因的细胞，可提高细胞中LDH水平和胞内细菌数量并可抑制CHOP的表达、IL-18 和IFN-γ的水平；M5-90感染沉默UBE2G2基因的细胞，可提高细胞CHOP的表达、IL-18和IFN-γ的水平并可抑制LDH水平和胞内细菌数量。结果表明，泛素结合酶UBE2G2可调控胞内布鲁氏菌存活。

关键词：布鲁氏菌;UBE2G2基因'UBE2G2基因;RNA干扰;真核表达;胞内存活