无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析

来源：江苏农业科学杂志2022年第第14期北京时间：

作者：魏后军;范志宇;胡波;仇汝龙;陈萌萌;宋艳华;徐为中;王芳

单位：江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，江苏南京 210014

摘要：为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性，根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列，对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺，同时对信号肽序列进行密码子优化，将化学合成的该序列插入到载体pET32a，获得重组质粒pET32a-αH176N，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示，αH176N蛋白在乳糖1~2 g/L、28 ℃诱导条件下高效分泌表达。卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示，αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性。免疫保护试验结果显示，αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗，以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果，优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果。

关键词：产气荚膜梭菌;α毒素;自诱导;分泌表达;免疫原性