小鼠IL-1Ra蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

来源：江苏农业科学杂志2022年第第9期北京时间：

作者：战俊澎;邹德颖;常江;杨馨;郭珣;张凯;刘益辛;胡盼;卢士英;李岩松;柳增善;任洪林

单位：1.人兽共患病研究教育部重点实验室/吉林大学人兽共患病研究所/吉林大学动物医学学院，吉林长春 130062； 2.辽宁省盘锦检验检测中心，辽宁盘锦 124000

摘要：以小鼠脾脏cDNA为模板，用降落PCR扩增IL-1Ra基因片段，IL-1Ra基因片段长约为537 bp。将IL-1Ra扩增片段和原核表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达质粒，在37 ℃诱导表达，重组表达的小鼠IL-1Ra蛋白的分子质量为19 ku。用纯度较好的小鼠IL-1Ra重组蛋白免疫兔子，制备特异性多克隆抗体；测定多克隆抗体的效价达到1 ∶4 096 000。经Western-Blot鉴定该抗体可与Raw264.7细胞中表达的小鼠IL-1Ra天然蛋白发生特异性结合。利用实时荧光定量PCR和Western-Blot检测表明布鲁氏菌S2弱毒株感染Raw264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)后小鼠IL-1Ra上调表达。本研究成功制备了小鼠IL-1Ra重组蛋白和兔抗多克隆抗体，为深入探讨小鼠IL-1Ra与布鲁氏菌感染之间的关系提供工具。

关键词：小鼠;IL-1Ra'IL-1Ra;原核表达;多克隆抗体;IL-1Ra重组蛋白