新型鹅星状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用
来源：江苏农业科学杂志2022年第第2期北京时间：
作者：肖亦辰; 杨颖; 马平; 赵冬敏; 章丽娇; 刘青涛; 杨婧; 李银; 刘宇卓; 韩凯凯; 黄欣梅
单位：1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095
摘要：新型鹅星状病毒(goose astrovirus，GoAstV)感染引起的鹅痛风病，是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一，给我国养鹅产业造成严重经济损失，快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法，根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物，构建质粒标准品，并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化。结果表明，该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段，其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性，具有较高的特异性。敏感性试验结果提示，最小检测限量达4.54×102 拷贝/μL。此外，该方法重复性良好，应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测，102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为4608%，24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%。本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，且操作简便、经济、快速，可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查。
关键词：新型鹅星状病毒;一步法RT-PCR;鉴别诊断;鹅痛风病;敏感性试验;临床样品检测
