兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

来源：江苏农业科学杂志2023年第第18期北京时间：

作者：王冠萱;陈萌萌;仇汝龙;范志宇;胡波;宋艳华;魏后军;葛雷;徐为中;王芳;钱莺娟

单位：1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，江苏南京 210014；2.南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部动物细菌学重点实验室，江苏南京 210095

摘要：兔出血症(rabbit hemorrhagic disease，RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断，建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的TaqMan实时PCR。结果显示，稀释度为1×108～1×104 copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系，决定系数r2为0.999；该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性，与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应；检测灵敏度为100~1 000 copies/μL；组内和组间变异系数在 0.01%～161%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测，结果显示，RHDV检出率为70.5%，敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此，该方法能够同时检测 RHDV1型和RHDV2型，可用于鉴别诊断兔出血症病毒。

关键词：兔出血症病毒1型;兔出血症病毒2型;双重 TaqMan qPCR