蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的实时荧光定量PCR检测

来源：江苏农业科学杂志2023年第第15期北京时间：

作者：宋起萱;浦艳飞;余蓉培;瞿素萍;杨春梅;吴丽芳;汪国鲜;阮继伟

单位：1.云南大学资源植物研究院，云南昆明 650504； 2.云南省农业科学院花卉研究所/国家观赏园艺工程技术研究中心，云南昆明 650205；3.玉溪云星生物科技有限公司，云南玉溪 653100

摘要：建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus，简称CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus，简称ORSV)是蝴蝶兰生产中的主要病毒病害，建立稳定、灵敏的检测体系是进行病毒早期检测和脱毒技术研究的前提。本研究首先对CymMV和ORSV 的外壳蛋白(coat protein，简称CP)基因片段进行克隆和序列比对，随后设计特异性引物，分别构建2种病毒的RT-qPCR(real time quantitative PCR，简称RT-qPC)检测体系，并对云南地区20份样品进行检测。研究结果显示，CymMV和ORSV CP基因序列与其他地区分离物中这2种病毒的核苷酸序列相似性分别为97.92%~98.66%和99.12%~99.56%，其CP基因序列具有保守性。CymMV和ORSV在RT-qPCR体系中最低检出浓度分别为30.9、35.0 copies/μL，灵敏度较RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction，简称 RT-PCR)提高10倍。利用RT-qPCR体系对20份温室样品进行检测，CymMV阳性率为100%，ORSV阳性率为90%，阳性率均高于RT-PCR检测结果。本研究构建的CymMV和ORSV RT-qPCR检测体系将为蝴蝶兰病毒病早期监测和脱毒种苗的培育奠定基础。

关键词：蝴蝶兰;建兰花叶病毒;齿兰环斑病毒;实时荧光定量PCR;病毒检测