兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RTPCR检测方法的建立和初步应用

来源：江苏农业科学杂志2025年第第13期北京时间：

作者：李嘉逸1;2;3;伍孟婷2;3;陈萌萌2;3;仇汝龙2;3;魏后军2;3;范志宇2;3;胡波2;3;葛雷2;3;李一鸣2;3;徐为中2;3;董海龙1;宋艳华2;3;王芳1;2;3

单位：1.西藏农牧学院，西藏林芝 860000； 2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210014； 3.兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心，江苏泰州 225300

摘要：为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus，LaRV)，根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应用。结果表明，阳性质粒标准品所建立的标准曲线在使用稀释度为1×107 copies/μL至1×102 copies/μL之间具有良好的线性关系，r2为0.999，扩增效率为98.781％；该方法对LaRV具有高度特异性，与兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型及兔多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等其他病原间无交叉反应；该方法灵敏度高，最低检测值为1×102 copies/μL，比普通PCR灵敏度提高了约100倍；该方法重复性良好，组内和组间变异系数在0.15%~1.41%之间，均小于2%。对45份临床样本采用构建的TaqMan探针荧光定量 RT-PCR 检测方法和常规RT-PCR检测方法进行对比，符合率为100%。因此，本研究建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR具有特异性强、敏感性高、重复性好等优势。

关键词：兔轮状病毒;TaqMan 探针;荧光定量RT-PCR;检测方法