重组腺病毒表达非洲猪瘟病毒pA104R蛋白免疫效果评价

来源：江苏农业科学杂志2025年第第7期北京时间：

作者：卢会鹏;顾陈怡;吴植;朱睿;曹世诺;雷昕诺;朱善元;孙怀昌;陈长春

单位：江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州 225300

摘要：将非洲猪瘟病毒(ASFV)的pA104R基因与分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合，并利用BJ5183-AD-1重组菌将融合基因嵌入rAd5复制缺陷型腺病毒基因组，获得含有融合基因的重组腺病毒质粒 pAd-A104R-Hsp70，并转染至HEK293A细胞，拯救重组腺病毒rAd-A104R-Hsp70。通过免疫荧光和免疫印记对拯救的病毒进行鉴定。将重组腺病毒通过腹腔途径免疫小鼠，剂量为108 PFU/只，首免14 d后以相同的剂量和途径加强免疫1次。免疫后不同时间点采集血清和脾细胞，利用间接ELISA检测血清中针对pA104R的特异性抗体。在首免28 d后采集小鼠脾细胞，采用pA104R重组蛋白刺激小鼠脾细胞，检测脾细胞上清中的IL-4和IFN-γ含量。结果显示，将pAd-A104R-Hsp70腺病毒质粒转染HEK293A细胞5 d后，细胞出现变圆、聚集成葡萄串状病变。用rAd-A104R-Hsp70感染HEK293A细胞，能被ASFV抗体阳性血清识别，感染的细胞经免疫印记鉴定，显示在17 ku处有单一的目的条带，说明目的基因在细胞中稳定表达。小鼠首次免疫后14 d，通过间接ELISA检测到小鼠血清中针对pA104R蛋白的特异性抗体，D450 nm为0.38，加强免疫后14 d升至1.53，显著高于对照组(P<0.01)。pA104R蛋白刺激下小鼠的脾细胞上清中的IL-4(28.43 pg/mL)和IFN-γ(1 281.67 pg/mL)细胞因子显著高于对照组(P<001)。本研究构建的融合Hsp70的pA104R重组腺病毒能有效激发小鼠的体液和细胞免疫反应，可为开发有效的ASFV疫苗提供理论支持。

关键词：非洲猪瘟;A104R;腺病毒载体;Hsp70;细胞免疫反应