ATP5B调节鸡原始生殖细胞形成的功能初探

来源：江苏农业科学杂志2025年第第6期北京时间：

作者：孙长花;赵娟娟;姚泽令

单位：1.扬州市职业大学生物与化工工程学院，江苏扬州 225009； 2.扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州 225009

摘要：为了研究ATP5B在鸡原始生殖细胞(PGCs)形成过程中的具体功能，通过构建家鸡ATP5B的短发夹RNA (shRNA)的慢病毒干扰载体，制备低表达ATP5B的鸡胚胎干细胞(ESCs)株，并对ATP5B在ESCs分化为PGCs过程中的功能进行研究。依据家鸡ATP5B的转录本设计2个RNA干扰靶点以构建ATP5B干扰载体，通过qRT-PCR方法检测各靶点对ATP5B的干扰效率，筛选出干扰效率最高的shRNA干扰载体，并进行慢病毒包装。利用ATP5B的慢病毒载体侵染ESCs后进行视黄酸(RA)诱导，观察细胞的形态变化，并收集各组不同时间的细胞，通过qRT-PCR、流式细胞术和间接免疫荧光等方法检测PGCs的形成效率以及生殖相关的标记基因相对表达量变化。结果表明，ATP5B干扰载体被成功构建，分别命名为shATP5B-1、shATP5B-2，其中shATP5B-2干扰效率高。ATP5B低表达的ESCs细胞株，体外利用RA诱导，6 d后观察发现PGCs样细胞明显增多，且C-kit 和Cvh等PGCs形成标记基因的表达极显著上升(P＜0.01)，而Oct4和Nanog等多能性标记基因的表达则极显著下降(P＜0.01)。ATP5B表达抑制后，CVH标记阳性细胞比率极显著高于对照组(P＜0.01)。本研究成功制备了ATP5B低表达的ESCs细胞株，证实ATP5B可以作为ESCs分化为PGCs的一个体外负向调控因子，为系统解析鸡PGCs的发生机制提供研究基础。

关键词：鸡;ATP合成酶亚基β基因;胚胎干细胞;分化;原始生殖细胞