鸡传染性贫血病毒VP2蛋白原核表达、生物信息学分析及其多克隆抗体制备

来源：江苏农业科学杂志2026年第第11期北京时间：

作者：韩凯凯1;2;3; 赵冬敏1;2;3; 黄欣梅1;2;3; 刘宇卓1; 李银1;2;3; 章丽娇1; 杨婧1; 卢凤英1; 吴凤瑶1; 苏丹1; 尹馨1; 赵永前4; 刘青涛1;2;3

单位：1.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014； 2.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095； 3.江苏大学生命科学学院，江苏镇江 212013； 4.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所，江苏南京 210014

摘要：鸡传染性贫血(chicken infectious anemia，CIA)是一种严重危害家禽养殖业的免疫抑制病，在全球范围内均有发生。鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus，CIAV)VP2蛋白又被称为辅助蛋白或者支架蛋白，对VP1蛋白中和表位的形成有重要影响。首先采用生物信息学方法预测VP2蛋白结构，然后以真核表达载体pFastBac1-VP2为模板，设计特异性引物PCR克隆CIAV VP2基因，构建原核表达载体pET28a-VP2。将经过鉴定的pET28a-VP2重组质粒转化入商品化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，加入IPTG诱导VP2蛋白表达，并确定VP2蛋白分布情况。利用Ni-NTA亲和层析法纯化VP2蛋白，获得重组VP2蛋白加入弗氏佐剂乳化后多点注射免疫小鼠，经3次免疫后采集小鼠血液，分离血清制备获得VP2蛋白多克隆抗体，并检测抗体效价和特异性。对VP2蛋白的结构信息运用生物信息学软件加以预测，结果显示该蛋白既不存在典型的跨膜螺旋结构，也未发现信号肽序列特征，为亲水性蛋白，含有多个B细胞抗原表位。收获的重组VP2蛋白大小约为26 ku，主要表达形式是包涵体。VP2蛋白多克隆抗体对原核表达的重组蛋白最高效价为1 ∶64 000，且能特异性识别CIAV蛋白。综上，制备获得的VP2蛋白多克隆抗体具有效价高和特异性强等特点，可用于ELISA和Western blot检测CIAV及VP2蛋白表达情况。

关键词：鸡传染性贫血病毒;VP2蛋白;原核表达;多克隆抗体