兔出血症病毒感染病毒血症分析及血浆外泌体的分离鉴定

来源：江苏农业科学杂志2026年第第7期北京时间：

作者：凌元芹;伍孟婷;魏后军;胡波;陈萌萌;徐业芬;王芳;宋艳华

单位：1.西藏农牧大学，西藏林芝 860000； 2.江苏省农业科学院兽医研究所，江苏南京 210014； 3.农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏南京 210014； 4.兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心，江苏泰州 225300

摘要：明确兔出血症病毒(RHDV)感染兔后病毒血症的动态规律，分离鉴定感染兔血浆外泌体，为深入阐明外泌体介导RHDV在宿主体内扩散传播的分子机制提供数据支撑。采用RHDV人工攻毒实验兔，于攻毒后不同时间点采集血液样本，通过实时荧光定量聚合酶链反应动态检测血浆中RHDV载量。在攻毒兔进入濒死期时采集血液并分离血浆，采用蔗糖密度梯度离心法分离外泌体，通过透射电子显微镜观察外泌体形态特征，纳米颗粒跟踪分析外泌体浓度及粒径分布，Western blot检测外泌体特异性标志蛋白及病毒结构蛋白。结果表明，RHDV感染后，血浆中病毒载量呈现显著动态变化，攻毒早期病毒载量较低，约为0.87 lg拷贝/mL~1.57 lg拷贝/mL；攻毒12~32 h进入快速增长阶段，病毒复制水平显著提升；攻毒32~42 h进入濒死期，病毒载量高达6.88 lg拷贝/mL，呈现高水平病毒血症。血浆外泌体分离鉴定结果表明，电镜下可见分离样本呈现外泌体典型的茶托状双层膜结构；纳米颗粒跟踪分析证实外泌体粒径集中于50~200 nm的外泌体特征粒径区间，且颗粒均一性良好；Western blot检出外泌体标志蛋白TSG101及RHDV结构蛋白VP60。综上，RHDV感染可诱导产生高水平病毒血症，攻毒后12~32 h是病毒血症快速进展的关键时期。本研究成功分离获得高均一性、高纯度的RHDV感染兔血浆外泌体，且外泌体可携带RHDV结构蛋白VP60。

关键词：兔出血症病毒;病毒血症;动态规律;外泌体;分离鉴定;实时荧光定量