牦牛源牛链球菌的分离鉴定及LMAP检测方法建立

来源：江苏农业科学杂志2026年第第5期北京时间：

作者：黄家艳;唐智慧;李子轩;符立发;赵瑜;张焱荣;王保宁;索朗斯珠

单位：1.西藏农牧大学动物科学学院，西藏林芝 860000； 2.四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都 610041； 3. 四川大学华西公共卫生学院，四川成都 610041

摘要：为了建立既快速又经济、且能在基层畜牧兽医站轻松实施的检测方法，从547份牦牛源粪便样本中分离鉴定牛链球菌，并分析其对抗菌药物的敏感性。针对牛链球菌16S rRNA 基因保守区域，设计种特异性引物，并构建一种快速、简便且具有较高灵敏度的LAMP检测方法。结果显示，经细菌分离培养、生化鉴定、PCR扩增鉴定，547份粪便样本分离出286株牛链球菌；药敏结果显示，21株菌株对头孢拉定和氧氟沙星高度敏感，对青霉素、红霉素、呋喃唑酮、庆大霉素耐药率较高；LAMP检测体系优化结果表明，该方法的最佳反应条件为60 ℃恒温扩增30 min，检测限为1.0×102拷贝数/μL。特异性试验显示，该方法与消化道常见菌群(如大肠杆菌、沙门氏菌)及其他链球菌属细菌无交叉反应，表明其具有良好的特异性和较高的灵敏度。临床牦牛粪便样本30份，LAMP法、细菌分离法和PCR法3种检测方法之间差异不显著(P>0.05)。LAMP法与细菌分离法间有较好的一致性(P<0.001且κ值为0.911)；LAMP法与PCR法间有中等的一致性(P<0.001且κ值为0734)；PCR法与细菌分离法间有较好的一致性(P<0.001且κ值为0.814)。以培养法为金标准，LAMP检测方法受试者工作特征曲线面积(0.978)>0.7，LAMP法具有牛链球菌感染诊断价值。

关键词：牦牛;牛链球菌;环介导等温扩增;药敏试验;耐药率;16S rRNA;可视化检测;LMAP检测方法