多粘类芽孢杆菌中L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达及固定化研究

来源：济南大学学报·自然科学版杂志2024年第05期北京时间：

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摘要：为了对D-半乳糖进行异构化制备D-塔格糖，从多粘类芽孢杆菌KF-1中克隆L-阿拉伯糖异构酶基因，并在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中表达；重组蛋白PpoLAI通过镍柱纯化，并利用壳聚糖微球进行固定化研究。结果表明：使用D-半乳糖作为底物时，PpoLAI的最佳温度和pH分别为50℃、 7.0; Mn~(2+)显著激活酶活性，当Mn~(2+)的浓度为0.8 mmol/L时，PpoLAI的活性最高；以D-半乳糖为底物的PpoLAI的米氏常数和分别为161.4 mmol/L及98.84μmol/(mg·min);PpoLAI的最优固定化条件为壳聚糖的质量分数为3%,戊二醛的体积分数为3%,游离酶添加量为0.9 mg/g,吸附温度为25℃,吸附时间为4 h, PpoLAI的固定化率为80.12%,固定化的PpoLAI的热稳定性、 pH稳定性与游离酶相比有显著提升。

关键词：D-塔格糖;L-阿拉伯糖异构酶;表达;酶活性;固定化

基金资助：国家自然科学基金项目(32270093);; 山东省科技型中小企业创新能力提升工程项目(2021TSGC1247)