基于流式细胞术的尿路感染活细菌快速准确测量技术研究

来源：计量学报杂志2025年第10期北京时间：

作者：王润润, 王蒙, 刘思渊, 王梓权, 张雅芬, 隋志伟

摘要：为了实现对尿路感染中活细菌数的快速准确测量，建立了一种基于流式细胞术（flow cytometry，FCM）结合叠氮溴化丙锭（propidium monoazide，PMA）以及荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）的新型测量方法，并验证了其测量效果。首先利用PMA标记膜破损的死菌 DNA；然后基于 FISH 的寡核苷酸探针特异结合细菌核酸序列，实现细菌广谱标记；最后通过 FCM 检测双重荧光信号从而实现对尿路感染中活细菌的准确测量。经技术参数优化后，该方法能在 1.5 h 内准确表征尿路感染中细菌的活性，检测结果与传统平板计数方法的结果具有良好的线性关系（R 2= 0.999），测量范围为104~108 cells/mL。该方法还可高效回收磷酸盐缓冲液和人工尿液中的活细菌，回收率分别为 94.46% 和 95.85%，表明PMA-FISH-FCM 方法具有准确测量真实样品的潜力。

关键词：生物计量,尿路感染,流式细胞术,荧光原位杂交,活菌计数,叠氮溴化丙锭

基金资助：国家重点研发计划(2023YFF0724500)