北京棒杆菌天冬氨酸激酶M372I-T379S双突变体的构建及其酶学性质

来源：吉林大学学报·理学版杂志2019年第5期北京时间：

作者：高云娜, 韩彩静, 詹冬玲, 方丽, 闵伟红

单位：吉林农业大学 食品科学与工程学院, 长春 130118

摘要：为构建高酶活力天冬氨酸激酶(aspartokinase, AK), 并削弱或解除Lys(lysine)反馈抑制作用突变体, 通过定点突变和高通量筛选技术构建突变体M372I,T379S和M372I-T379S, 对野生型（WT）和突变体分别进行诱导表达、 纯化及酶学性质表征. 结果表明： 突变体M372I,T379S和M372I-T379S AK与WTAK相比, Vmax分别提高了13.77,15.02,15.60倍, Km和n值均降低； 最适pH值分别升高为8.0,8.5,8.5, 且半衰期分别延长了1.0,0.9,2.3 h； M372I-T379S AK最适温度为30 ℃, 比WT AK高2 ℃； 当浓度为1~10 mmol/L时, 突变体均削弱或部分解除了抑制剂Lys的反馈抑制作用.

关键词：天冬氨酸激酶,定点突变,酶动力学,酶学性质