麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征

来源：吉林大学学报·理学版杂志2024年第3期北京时间：

作者：高雨晴, 董钢印, 张洪瑞, 马占山, 方丽, 詹冬玲

单位：吉林农业大学 食品科学与工程学院， 长春 130118；吉林农业大学 生物质活性成分研究与高附加值农产品实验室， 长春 130118

摘要：以大型真菌灵芝中的麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶（MGAM）为研究对象， 采用同源序列比对、 同源模建、 底物对接和定点突变等方法成功构建酶活力显著降低的突变体D246A. 酶学性质表征结果表明： 最适反应温度由野生型（wild type， WT）的65 ℃减少至60 ℃， 突变体耐热能力下降； 最适pH值由WT的6.0升高至7.0， 有利于工程菌生长； 半衰期由WT的2.0 h下降至1.5 h， 酶稳定性降低. 酶动力学结果表明： 突变体D246A酶动力学曲线符合Michaelis方程， 与WT相比， Km值变大， 表明酶与底物亲和力下降； Vmax约降低至原来的1/4.

关键词：定点突变,异源表达,性质表征,麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶